D-aminosav tartalmú mucin 2 peptidek fragmentálódása humán szérumban
Tugyi Reginaa,baMTA-Kémiai Kutatóközpont, Bp., 1025 Pusztaszeri út 59-67.
bMTA-ELTE Peptidkémiai Kutatócsoport, Bp., 1117 Pázmány P. sétány 1/A
Hatékony immunizálás érdekében fontos olyan szintetikus peptid alapú immunogének kifejlesztése, amelyek a szervezetben a célsejt (szövet) eléréséig stabilak maradnak. Ennek érdekében különféle kémiai módosítás alkalmazása lehetséges (pl. ciklizálás, D-aminosav beépítése, konjugálás). A kémiai módosítás enzimatikus stabilitásra és epitópspecifikus ellenanyagkötõdésre gyakorolt hatásának vizsgálatára a mucin 2 glikoprotein (MUC2) ismétlõdõ szakaszából származó 15TPTPTGTQTPT25 epitópot választottuk ki, amit fehérje specifikus ellenanyagok ismernek fel tumorszövetben is. Az epitóp C- és/vagy N-terminálisán különbözõ számú aminosavat cseréltünk D-izomerre. Az ellenanyagkötõdésért felelõs szakasz így a peptid centrális részén helyezkedik el, míg a D-aminosavak az N- és/vagy C-terminális lebegõ régiókban találhatók (pl. 15tptPTGTQtpt25). A peptidek enzimatikus bomlását 10 és 50%-os humán szérumban vizsgáltuk. A hasadást kinetikáját és mértékét RP-HPLC módszerrel követtük nyomon. Célunk volt a peptidekbõl keletkezõ fragmensek molekulatömegük alapján történõ azonosítása, valamint annak meghatározása, hogy a különbözõ számú és pozíciójú D-aminosavnak milyen hatása van a fragmentálódás mértékére. A bomlástermékek molekulatömegét Q-TOF tömegspektrometriás módszerrel határoztuk meg. Megállapítottuk, hogy az epitóp peptid teljes stabilitása elérhetõ – mindkét terminálison történõ - D-aminosav-szubsztitúció segítségével. Megfigyeltük továbbá, hogy higított szérumban - a D-aminosav jelenléte és száma által meghatározott módon - különbözõ fragmensek keletkezésnek.
Bruckner-termi elõadások
Kémiai Osztály